Η καριέρα της αγαπημένης ηθοποιού ξεκίνησε στα τέλη της δεκαετίας του '20 με κάποιες εμφανίσεις της στο κινηματογράφο και διήρκησε έξι δεκαετίες.
Το 1939 υποδύθηκε τη Maisie Ravier στην ταινία "Maisie", ένας χαρακτήρας που αγαπήθηκε πολύ από το κοινό με αποτέλεσμα να ακολουθήσει μια επιτυχημένη σειρά ταινιών και ραδιοφωνικών εκπομπών με τίτλο "The Adventures of Maisie".
Το 1953 εμφανίστηκε στην τηλεόραση στην κωμική σειρά "Private Secretary". Η σειρά προβλήθηκε πέντε σεζόν από το CBS με τη Sothern να κερδίζει τρεις υποψηφιότητες για Primetime Emmy Award. Μετά τη σειρά "The Ann Sothern Show" το 1958, συνέχισε την καριέρα της τη δεκαετία του '60 με εμφανίσεις στη σκηνή και τη μεγάλη οθόνη αλλά και guest ρόλους σε σειρές στην τηλεόραση. Το 1987 εμφανίστηκε στην τελευταία ταινία της "The Whales of August", με τις Bette Davis και Lillian Gish, κερδίζοντας μία υποψηφιότητα για Oscar. Μετά την ολοκλήρωση των γυρισμάτων αποσύρθηκε στο Ketchum του Idaho όπου έζησε τα τελευταία χρόνια της ζωής της.
